細胞培養過程中,若血清選擇不當不僅會造成試驗的失敗,而且造成的人力、物力和財力的損失,特別是對異地珍惜動物品種,更是難以想象。但是,目前市場上血清種類繁多,質量參差不齊。因此研究不同種類的血清對細胞培養的影響具有十分重要的現實意義。目的就是追求高效率、低成本,通過對比試驗在短時間內找到培養細胞的血清,從而達到省時、省力、省資源的目的。
專用血清中含有豐富的細胞生長必需的營養成分,血清在體外可以再造適于細胞生長、繁殖、黏附和分化的生理環境,是組織細胞培養中常用的天然培養基,在動物細胞生長培養中起著十分重要的作用。血清中的主要成分為蛋白質、多肽、激素等,那些被發現有作用的蛋白質,主要為白蛋白和球蛋白。
血液凝固析出的淡黃色透明液體,如將血液自血管內抽出,放入試管中,不加抗凝劑,則凝血反應被激活,血液迅速凝固,形成膠凍。其周圍所析出之淡黃色透明液體即為專用血清,也可于凝血后經離心取得。在凝血過程中,纖維蛋白原轉變成纖維蛋白塊,所以血清中無纖維蛋白原,這一點是與血漿的區別。而在凝血反應中,血小板釋放出許多物質,各凝血因子也都發生了變化。這些成分都留在血清中并繼續發生變化,如凝血酶原變成凝血酶,并隨血清存放時間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區別之處。但大量未參加凝血反應的物質則與血漿基本相同。為避免抗凝劑的干擾,血液中許多化學成分的分析,都以血清為樣品。
正常專用血清,來源于非免疫的大鼠宿主,經過脂質萃取PBS溶液透析,改善其透明度。推薦用PBS將封閉血清原液稀釋5-20倍,配成5%-20%的工作液,直接滴加在組織切片或者細胞涂片上,37℃度孵育10-30分鐘,清除血清,勿洗,滴加適當比例稀釋的一抗工作液,37℃孵育1-2h或4℃過夜。注意:封閉用血清中不能含有目標蛋白,且與一抗來源不同,可用與二抗相同來源的封閉血清。